Protokoly (Apríl 2020)

Použitie zvýšeného plus bludiska ako testu správania súvisiaceho s úzkosťou u hlodavcov

Použitie zvýšeného plus bludiska ako testu správania súvisiaceho s úzkosťou u hlodavcov

abstraktné Zvýšené plus bludisko je široko používaným testom správania pre hlodavce a bol validovaný na hodnotenie anti-úzkostných účinkov farmakologických látok a steroidných hormónov a na definovanie oblastí mozgu a mechanizmov, ktoré sú základom správania súvisiaceho s úzkosťou. Stručne, potkany alebo m

Generovanie definovanej a jednotnej populácie progenitorov CNS a neurónov z myších embryonálnych kmeňových buniek

Generovanie definovanej a jednotnej populácie progenitorov CNS a neurónov z myších embryonálnych kmeňových buniek

abstraktné Je opísaný podrobný protokol umožňujúci generovanie v podstate čistých populácií glutamatergických neurónov z myších embryonálnych kmeňových buniek (ES). Je založená na kultúre buniek ES, ktoré sú nediferencované opakovaným rozdelením a následne amplifikované ako neadherujúce bunkové agregáty. Ošetrenie kyselinou retínovou

Korigendum: Štandardizovaný protokol pre opakovaný stres v sociálnej porážke u myší

Korigendum: Štandardizovaný protokol pre opakovaný stres v sociálnej porážke u myší

Pôvodný článok bol uverejnený 21. júla 2011 Nat. Pretočí. 6 , 1183 - 1191 (2011); doi: 10, 1038 / nprot.2011.361; uverejnené online 21. júla 2011; opravené po tlači 17. decembra 2014 V pôvodne uverejnenej verzii tohto článku došlo k určitým nejasnostiam pri výklade vety „Ďalej by sa porážky mali uskutočňovať pod neustálym veterinárnym hodnotením as plným schválením všetkých potrebných inštitucionálnych kontrolných rád a noriem.“ V záujme väčšej jasnosti sa veta bol

Cytokinéza - blokuje mikronukleárny cytómový test

Cytokinéza - blokuje mikronukleárny cytómový test

Tento článok bol aktualizovaný abstraktné Cytokinéza blokujúci mikronukleový cytómový test je komplexný systém na meranie poškodenia DNA, cytostázy a cytotoxicity. Udalosti poškodenia DNA sa hodnotia špecificky v raz rozdelených dvojjadrových (BN) bunkách a zahŕňajú (a) mikronukleárne bunky (MNi), biomarker rozpadu chromozómov a / alebo stratu celých chromozómov, b) nukleoplazmatické mostíky (NPB), biomarker DNA nesprávne fúzie a / alebo zakončenie fúzií telomér a c) jadrové púčiky (NBUD), biomarker eliminácie amplifikovaných komplexov DNA a / alebo opravy DNA. Cytostatické účinky sa merajú pro

Miestne špecifická inkorporácia fluórtyrozínov do R2 podjednotky ribonukleotidovej reduktázy E. coli expresiou ligácie proteínov

Miestne špecifická inkorporácia fluórtyrozínov do R2 podjednotky ribonukleotidovej reduktázy E. coli expresiou ligácie proteínov

abstraktné Expresia ligovanej bielkoviny (EPL) umožňuje semisyntézu cieľového proteínu s miestne špecifickým začlenením sond alebo neprirodzených aminokyselín na jeho N alebo C koncoch. Tu opisujeme protokol, ktorý vyvinul náš laboratórium na začlenenie fluórtyrozínov (Fn Ys) do zvyšku 356 malej podjednotky ribonukleotidovej reduktázy Escherichia coli použitím EPL. Pri tomto postupe sa v

Korigendum: Analýza počtu kópií jednotlivých buniek v jednotlivých genómoch

Korigendum: Analýza počtu kópií jednotlivých buniek v jednotlivých genómoch

Pôvodný článok bol uverejnený 3. mája 2012 Nat. Pretočí. 7 , 1024 - 1041 (2012); uverejnené online 3. mája 2012; opravené po tlači 24. februára 2016 Vo verzii tohto článku pôvodne publikovanej boli jednotky koncentrácie NaCl v pufri NST opísané v časti Nastavenie reagencií nesprávne. Správna jednotka by

Vysoko výkonný in vivo mikronukleový test na skríning genómovej nestability u myší

Vysoko výkonný in vivo mikronukleový test na skríning genómovej nestability u myší

predmety Poškodenie a oprava DNA Prietoková cytometria Genomická nestabilita myš abstraktné Opisujeme citlivú, robustnú, vysoko výkonnú metódu na kvantifikáciu tvorby mikrojadier, markerov nestability genómu, v erytrocytoch myši. Mikrojadrá sú celé chromozómy alebo chromozómové segmenty, ktoré boli oddelené od jadra. Iné metódy detekcie

Skríning substrátovej aktivity (SAS): všeobecný postup prípravy a skríningu nepeptidovej proteázovej substrátovej knižnice na báze fragmentov na zistenie inhibítorov.

Skríning substrátovej aktivity (SAS): všeobecný postup prípravy a skríningu nepeptidovej proteázovej substrátovej knižnice na báze fragmentov na zistenie inhibítorov.

abstraktné Skríning substrátovej aktivity (SAS) je metóda založená na fragmentoch pre rýchly vývoj nových substrátov a ich konverziu na nepeptidové inhibítory Cys a Ser proteáz. Metóda pozostáva z troch krokov: (i) knižnica N -acylaminokumarínov s rôznymi N -acylovými skupinami s nízkou molekulovou hmotnosťou sa skrínuje na identifikáciu proteázových substrátov pomocou jednoduchého testu založeného na fluorescencii; (ii) identifikované N -acylaminokumarínové substráty sú optimalizované rýchlou analógovou syntézou a vyhodnotením; a (iii) optimalizované substráty sa premieňajú na inhibítory priam

Primárna kultúra hovädzích chromafínových buniek

Primárna kultúra hovädzích chromafínových buniek

abstraktné Tento protokol opisuje primárnu kultúru jednotlivých chromafínových buniek odvodených enzymatickým štiepením z nadobličkovej drene bovinnej nadobličky. Od konca sedemdesiatych rokov tieto bunky poskytujú užitočný modelový systém na štúdium biosyntézy, ukladania a uvoľňovania neurotransmiterov v katechominergickom systéme. Protokol možno rozdeli

Testy založené na biosenzoroch pre PQS, HHQ a príbuzné signálne molekuly snímajúce 2-alkyl-4-chinolónové kvórum

Testy založené na biosenzoroch pre PQS, HHQ a príbuzné signálne molekuly snímajúce 2-alkyl-4-chinolónové kvórum

abstraktné 2-Alkyl-4-chinolóny (AHQ), ako sú 2-heptyl-3-hydroxy-4-chinolón (PQS) a 2-heptyl-4-chinolón (HHQ), sú signálne molekuly snímajúce kvórum. Tu opisujeme metódy na detekciu AHQ, predbežnú identifikáciu a kvantifikáciu, ktoré využívajú lux- založený biosenzorový kmeň AHQ Pseudomonas aeruginosa . Protokol opisuje ako

Kvantitatívna analýza záchytných konformácií chromozómov (3C-qPCR)

Kvantitatívna analýza záchytných konformácií chromozómov (3C-qPCR)

abstraktné Technológia snímania konformácie chromozómov (3C) je priekopníckou metodológiou, ktorá umožňuje skúmať genomickú organizáciu in vivo v mierke zahŕňajúcej niekoľko desiatok až niekoľko stoviek kilobázových párov. Pochopenie skladania genómu v tomto meradle je zvlášť dôležité u cicavcov, v ktorých sú do génovej regulácie zapojené dispergované regulačné prvky, ako sú zosilňovače alebo izolátory. Technológia 3C zahŕňa fixáciu buniek for

Tvorba bezbunkových extraktov vajíčok Xenopus a demembranovaného spermatického chromatínu na zostavenie a izoláciu jadier vytvorených in vitro pre Western blotting a skenovaciu elektrónovú mikroskopiu (SEM)

Tvorba bezbunkových extraktov vajíčok Xenopus a demembranovaného spermatického chromatínu na zostavenie a izoláciu jadier vytvorených in vitro pre Western blotting a skenovaciu elektrónovú mikroskopiu (SEM)

abstraktné Tento protokol podrobne opisuje metódy na generovanie bezbunkových extraktov a templátov DNA z vajec a spermatického chromatínu, respektíve Xenopus laevis . Tento systém sme použili so skenovacou elektrónovou mikroskopiou (SEM), ako je podrobne uvedené v tomto dokumente, na analýzu biochemických požiadaviek a štruktúrnych ciest pre biogenézu eukaryotických jadrových obalov (NE) a komplexov jadrových pórov (NPC). Tento protokol vyža

Získanie genómov z nekultivovaných environmentálnych mikroorganizmov pomocou jednobunkovej genomiky založenej na FACS

Získanie genómov z nekultivovaných environmentálnych mikroorganizmov pomocou jednobunkovej genomiky založenej na FACS

predmety Environmentálna mikrobiológia Prietoková cytometria Genomics Amplifikácia celého genómu abstraktné Jednobunková genomika je mocným nástrojom na skúmanie genetického zloženia environmentálnych mikroorganizmov, z ktorých väčšina je ťažké, ak nie nemožná, kultivovať súčasnými prístupmi. Tu uvádzame komplexný prot

Kolagénom indukovaná artritída

Kolagénom indukovaná artritída

abstraktné Myší model kolagénom indukovanej artritídy (CIA) je najčastejšie študovaným autoimunitným modelom reumatoidnej artritídy. Autoimunitná artritída sa v tomto modeli indukuje imunizáciou emulziou kompletného Freundovho adjuvans a kolagénu typu II (CII). Tento protokol opisuje kroky potrebné na získanie, manipuláciu a prípravu CII, ako aj výber myších kmeňov, správnu imunizačnú techniku ​​a vyhodnotenie výskytu a závažnosti artritídy. Typicky sa prvé príznaky artritíd

Tvorba cerebrálnych organoidov z ľudských pluripotentných kmeňových buniek

Tvorba cerebrálnych organoidov z ľudských pluripotentných kmeňových buniek

predmety Vývoj nervového systému neurogeneze Neurologické modely Diferenciácia kmeňových buniek abstraktné Vývoj ľudského mozgu vykazuje niekoľko jedinečných aspektov, ako je zvýšená zložitosť a expanzia neuronálneho vývinu, ktoré sa ukázali ako ťažké študovať na modelových organizmoch. Výsledkom je, že in vitro p

Erratum: Analýza zviazaných častíc supercoiled cirkulárnej DNA pomocou peptidových úchytov nukleových kyselín

Erratum: Analýza zviazaných častíc supercoiled cirkulárnej DNA pomocou peptidových úchytov nukleových kyselín

Pôvodný článok bol uverejnený 21. augusta 2014 Nat. Pretočí. 9 , 2206 - 2223 (2014); doi: 10, 1038 / nprot.2014.152; uverejnené online 21. augusta 2014; opravené po tlači 12. septembra 2014 V pôvodne uverejnenej verzii tohto článku nebol zdroj, z ktorého boli obrázky 2, 4, 8 a 9 upravené, citovaný a správne pripísaný. Chyba bola opraven

Komplexná analýza mononukleárnych fagocytov sietnice

Komplexná analýza mononukleárnych fagocytov sietnice

predmety neuroimunologii sietnice abstraktné Vrodený imunitný systém je aktivovaný pri mnohých degeneratívnych a zápalových ochoreniach sietnice, ako je makulárna degenerácia súvisiaca s vekom (AMD). Retinálne mikroglie, choroidálne makrofágy a rekrutované monocyty, súhrnne nazývané „retinálne mononukleárne fagocyty“, sú kritickými determinantami výsledku očných chorôb. Mnoho publikácií opísalo prít

Vývoj, validácia a implementácia afinity imobilizovaného kovu pre vysoko výkonné skríningové testy na báze fosfochemikálií (IMAP) pre knižnice zlúčenín s nízkou molekulovou hmotnosťou

Vývoj, validácia a implementácia afinity imobilizovaného kovu pre vysoko výkonné skríningové testy na báze fosfochemikálií (IMAP) pre knižnice zlúčenín s nízkou molekulovou hmotnosťou

abstraktné Tento protokol popisuje vývoj testu, validáciu a implementáciu automatizovanej imobilizovanej kovovej afinity pre fosfochemikálie (IMAP) na báze fluorescenčnej polarizácie (FP) a časovo rozlíšené fluorescenčné rezonančné prenosy energie (TR-FRET) vysokovýkonné skríningové testy (HTS) na identifikáciu inhibítory kinázy s nízkou molekulovou hmotnosťou. Oba postupy sa uskutočň

Korigendum: nanokatalyzátory na báze kobaltu pre zelené oxidačné a hydrogenačné procesy

Korigendum: nanokatalyzátory na báze kobaltu pre zelené oxidačné a hydrogenačné procesy

Pôvodný článok bol uverejnený 21. mája 2015 Nat. Pretočí. 10 , 916 - 926 (2015); uverejnené online 21. mája 2015; opravené po tlači 16. septembra 2015 V pôvodne uverejnenej verzii tohto článku mal rámček 1 nesprávny názov; správny názov je „Experimenty s recykláciou katalyzátora s nitrobenzénom: 30 hodín.“ Chyba bola opravená (pre