Nový dôkaz, že k mobilizácii hematopoetických kmeňových / progenitorových buniek (hspcs) dochádza k presluchovaniu medzi proteolytickými kaskádami komplementu, koagulácie a fibrinolýzy | leukémie

Nový dôkaz, že k mobilizácii hematopoetických kmeňových / progenitorových buniek (hspcs) dochádza k presluchovaniu medzi proteolytickými kaskádami komplementu, koagulácie a fibrinolýzy | leukémie

Anonim

predmety

  • Migrácia buniek
  • Bunková signalizácia
  • Hematopoetické kmeňové bunky

abstraktné

Úloha krvných proteináz pri mobilizácii krvotvorných kmeňových / progenitorových buniek (HSPC) ešte stále nie je dostatočne objasnená. Ako už bolo uvedené, aktivácia komplementovej kaskády (ComC) a štiepenie C5 konvertázou C5 umožňujú udalosti pri uvoľňovaní C5a, ktoré hrá kľúčovú úlohu pri výstupe HSPC z kostnej drene (BM) do periférnej krvi (PB) a vysvetľuje, prečo sú myši s deficitom C5 slabými mobilizátormi. Tu uvádzame dôkaz, že počas mobilizácie indukovanej faktorom stimulujúcim kolónie granulocytov a AMD3100 sa aktivujú nielen ComC, ale aj ďalšie dva evolučne starodávne proteolytické enzýmové kaskády, koagulačná kaskáda (CoaC) a fibrynolytická kaskáda (FibC). Aktivácia všetkých troch kaskád bola meraná vytvorením C5a, znížením protrombínového času a aktivovaného parciálneho tromboplastínového času, ako aj zvýšením koncentrácií plazmínu / antiplazmínu a trombínu / antitrombínu. Ešte dôležitejšie je, že CoaC a FibC vytváraním trombínu a plazmínu, v danom poradí, poskytujú aktivitu C5 konvertázy, čo vysvetľuje, prečo nie je narušená mobilizácia HSPC u myší s deficitom C3, ktoré negenerujú ComC-generovanú C5a konvertázu. Naše pozorovania vniesli viac svetla na to, ako modulácie CoaC a FibC modulujú mobilizáciu kmeňových buniek a môžu viesť k rozvoju efektívnejších stratégií mobilizácie u chudobných mobilizátorov. Ďalej, ako je známe, že všetky tieto kaskády sú aktivované vo všetkých situáciách, v ktorých sú HSPC mobilizované z BM do PB (napríklad infekcie, poškodenie tkanív / orgánov alebo namáhavé cvičenie) a vykazujú cirkadiánny rytmus aktivácie, musia byť zapojené do stresom indukovaných a cirkadiánnych zmien v obchodovaní s HSPC v PB.

úvod

Hematopoetické kmeňové / progenitorové bunky (HSPC) exprimujú na svojom povrchu chemokínový receptor CXCR4 a veľmi neskorý antigén-4 receptor (VLA-4, známy tiež ako integrín a4p1) a sú udržiavané v medzerách v kostnej dreni (BM) interakciou z týchto receptorov s ich príslušnými ligandami, rastovým faktorom-1 odvodeným od a-chemokínového stromu (SDF-1) a vaskulárnou adhéznou molekulou-1 (VCAM-1, tiež známy ako CD106), ktoré sú exprimované bunkami v mikroprostredí BM (pre napríklad osteoblasty a fibroblasty). 1, 2, 3, 4, 5

HSPC s bydliskom v BM sa uvoľňujú zo svojich výklenkov a cirkulujú za ustálených podmienok pri detekovateľných hladinách v periférnej krvi (PB) a ich počet sa zvyšuje v reakcii na (1) systémový alebo miestny zápal, (2) namáhavé cvičenie, (3) ) stres, (4) poškodenie tkaniva / orgánu a (5) farmakologické látky. 6, 7, 8 Všetky tieto procesy zahŕňajú aktiváciu komplementovej kaskády (ComC) a myši s deficitom v downstream komponente ComC, komplementový proteín 5 (C5), sú veľmi slabými mobilizátormi. 9 Toto bolo vysvetlené demonštrovaním, že fragment C5 štiepenia C5a, ktorý je aktivovaný v sínusoidoch BM, je rozhodujúci pre výstup granulocytov a monocytov z BM a že tieto bunky počas mobilizácie pripravujú cestu pre HSPC cez PB-BM bariéru. 9 C5a súčasne aktivuje granulocyty a monocyty, aby uvoľnil niekoľko proteolytických enzýmov v mikroprostredí BM, ktoré zoslabujú retenčné signály SDF-1 – CXCR4 a VLA4 – VCAM-1 vo výklenkoch BM. 4, 9

Je tiež známe, že aktivácia ComC, podobná koagulačnej kaskáde (CoaC) a fibrynolytickej kaskáde (FibC), je založená na postupnej aktivácii proteolytických proenzýmov zhora nadol kaskády. 10, 11 Preto nedostatok upstream C3 by mal teoreticky ovplyvňovať tvorbu C5 konvertázy generovanej ComC, proteolytického enzýmu aktivujúceho C5. Prekvapivo sú C3 - / - myši ľahkými mobilizátormi 12, čo naznačuje, že iné proteolytické enzýmy v krvnej plazme nahrádzajú C5 konvertázu generovanú ComC. Aby sme vysvetlili, ako môže byť C5 aktivovaný počas mobilizačného procesu, aj keď chýba C3, predpokladali sme, že iné proteázy, ktoré sú produktmi aktivovaného CoaC a FibC, kompenzujú nedostatok proteolytickej aktivity C5 konvertázy odvodenej od ComC. Na podporu tejto hypotézy sa preukázalo, že CoaC aj FibC majú počas niektorých vrodených imunitne sprostredkovaných reakcií silné kríženie s ComC. Ukázalo sa tiež, že podávanie trombínu (DrT Lapidot, osobná komunikácia) alebo plazmínu 13 môže zvýšiť mobilizáciu HSPC, čo naznačuje úlohu týchto enzýmov v mobilizačnom procese. Aby sa to ďalej podporilo, mobilizácia HSPC indukovaná G-CSF bola uľahčená u myší s deficitom aktivátora plazminogénu-1 a inhibítora plazmínu-a2 antiplazmínu. 13 Mobilizácia HSPC sa okrem toho podieľa na aktivácii plazminogénu ukotveného na membráne, na receptore urokinázy 14 a na štiepenej forme rozpustného receptora 15 na urokináze.

V našich experimentoch bola mobilizácia hodnotená u C3-deficientných myší (C3 - / - ) a normálnych psov divokého typu (WT) mobilizovaných faktorom stimulujúcim kolónie granulocytov (G-CSF) alebo antagonistom receptora CXCR4 AMD3100 v prítomnosti alebo neprítomnosti. refludanu (priamy inhibítor trombínu) a kyseliny tranexámovej (inhibítor aktivácie plazminogénu). Paralelne sme merali aktiváciu všetkých troch kaskád detekciou hladiny C5a v PB a meraním protrombínového času (PT) a aktivovaného parciálneho tromboplastínového času (APTT), ako aj koncentrácií trombín / antitrombínových a plazmin / antiplazmínových komplexov.

Údaje prezentované v tejto práci po prvýkrát demonštrujú existenciu silného presluchu medzi všetkými tromi evolučne starými proteolytickými enzýmovými kaskádami, ComC, CoaC a FibC, v procese mobilizácie HSPC. Zistili sme, že mobilizácia HSPC indukovaná G-CSF bola významne znížená u normálne ľahko mobilizujúcich myší C3 - / -, keď boli myši ošetrené refludanom (inhibítor CoaC) alebo kyselinou tranexámovou (inhibítor FibC) a že toto zníženie korelovalo s významná inhibícia C5 aktivácie / štiepenia. Významne sme tiež pozorovali, že inhibítory CoaC a FibC mali negatívny vplyv na mobilizáciu HSPC u normálnych zvierat WT. Naše pozorovania presluchu medzi ComC, CoaC a FibC lepšie vysvetľujú účinok trombínu a plazmínu na mobilizáciu kmeňových buniek a môžu viesť k vývoju efektívnejších stratégií mobilizácie u chudobných mobilizátorov a mobilizovaných pacientov liečených liekmi, ktoré interferujú s CoaC / FIBC.

výsledok

Mobilizácia G-CSF a AMD3100 je narušená u C3 - / - myší v prítomnosti refludanu a / alebo kyseliny tranexámovej.

Už sme uviedli, že inhibícia CoaC refludanom zhoršuje G-CSF-indukovanú mobilizáciu HSPC u C3 - / - myší. V tejto správe uvádzame, že okrem inhibície CoaC má aj inhibícia FibC podobný účinok. Okrem toho inhibícia oboch týchto proteolytických kaskád v rovnakom čase ešte výraznejšie ovplyvňuje počet mobilizovaných WBC, SKL a CFU-GM cirkulujúcich v PB (obrázok la). Uvádzame tu prvýkrát, že refludan a kyselina tranexamová majú podobné negatívne účinky na mobilizáciu HSPC indukovanú AMD3100 u myší C3 - / - (obrázok 1b). Tieto údaje podporujú hypotézu, že trombín aj plazmín v skutočnosti vykazujú aktivitu podobnú C5 konvertáze. 10

Image

Účinok inhibície CoaC a FibC na mobilizáciu HSPC u myší s deficitom C3. Myši C3 - / - boli mobilizované počas 6 dní pomocou ( a ) G-CSF (250 μg / kg subkutánne (sc) za deň; n = 6 myší na skupinu) alebo pomocou ( b ) AMD3100 (5 mg / kg sc) v prítomnosť alebo neprítomnosť refludanu (podávaného denne počas 6 dní, 5 mg / kg intraperitoneálne (ip)) alebo kyseliny tranexámovej (podávaná počas 6 dní, 20 mg / myši / deň sc). Sú uvedené počty cirkulujúcich leukocytov (ľavé panely), SKL bunky (stredné panely) a progenitory CFU-GM (pravé panely) na μl PB. Iba A, AMD3100; A + R, AMD3100 + refludan; A + R + T, AMD3100 + refludan + kyselina tranexamová; A + T, AMD3100 + kyselina tranexámová; Ctrl, kontrola; Iba G, G-CSF; G + R + T, G-CSF + refludan + kyselina tranexamová; G + T, G-CSF + kyselina tranexámová; R, iba refludan; T, iba kyselina tranexamová. * P <0, 05; ** P <0, 01. Toto sú reprezentatívne výsledky z troch nezávislých experimentov pre G-CSF a dvoch nezávislých experimentov pre AMD3100.

Obrázok v plnej veľkosti

Ako je však znázornené na obrázku 1, mobilizácia nebola úplne inhibovaná po súčasnej inhibícii CoaC a FibC, čo znamená, že môže byť prítomná nejaká zvyšková aktivita trombínu a plazmínu, alebo niektoré iné plazmatické proteázy čiastočne kompenzujú aktivitu trombínu a plazmínu. 17 Ukazuje tiež, že pokiaľ sa použije samotný, ani refludan, ani kyselina tranexamová neovplyvňujú skupinu cirkulujúcich HSPC.

Podávanie refludanu a / alebo kyseliny tranexámovej tiež zhoršuje mobilizáciu kmeňových buniek u normálnych WT vrhov

V tejto štúdii uvádzame tiež údaje, ktoré ukazujú, že inhibícia CoaC a FibC má negatívny vplyv na mobilizáciu HSPC po mobilizácii buď G-CSF- (obrázok 2a) alebo AMD3100 (obrázok 2b). Tento účinok bol zvlášť viditeľný pri mobilizácii indukovanej G-CSF, keď sa spoločne používali kyselina refludan a kyselina tranexamová. Pri mobilizácii vyvolanej AMD3100 však pridanie kyseliny tranexámovej k refludanu významne nezvýšilo účinok samotného refludanu u zvierat WT (obrázok 2b).

Image

Účinok inhibície CoaC a FibC na mobilizáciu HSPC u WT myší. Myši WT boli mobilizované počas 6 dní pomocou ( a ) G-CSF (250 μg / kg subkutánne (sc) za deň, n = 6 myší na skupinu) alebo ( b ) AMD3100 (5 mg / kg sc) v prítomnosti alebo neprítomnosť refludanu (podávaného denne počas 6 dní, 5 mg / kg intraperitoneálne (ip)) alebo kyseliny tranexámovej (podávaná počas 6 dní, 20 mg / myši / deň sc). Sú uvedené počty cirkulujúcich leukocytov (ľavé panely), SKL bunky (stredné panely) a progenitory CFU-GM (pravé panely) na μl PB. Iba A, AMD3100; A + R, AMD3100 + refludan; A + R + T, AMD3100 + refludan + kyselina tranexamová; A + T, AMD3100 + kyselina tranexámová; Ctrl, kontrola; Iba G, G-CSF; G + R + T, G-CSF + refludan + kyselina tranexamová; G + T, G-CSF + kyselina tranexámová; R, iba refludan; T, iba kyselina tranexamová. * P <0, 05; ** P <0, 005. Sú to kombinované výsledky z troch nezávislých experimentov pre G-CSF a dvoch nezávislých experimentov pre AMD3100.

Obrázok v plnej veľkosti

Ako bolo opísané v minulosti, 12 sme pozorovali, že v reakcii na podávanie G-CSF, myši C3 - / - mobilizujú väčšie množstvo HSPC do PB (obrázok la) ako WT vrhy (obrázok 2a), čo naznačuje, že fragmenty štiepenia C3 podporujú CXCR4- závislá retencia HSPC v BM. 4, 12 Je zaujímavé, že keď sme v našej súčasnej štúdii použili antagonistu CXCR4 AMD3100, tento rozdiel v mobilizácii nebol zrejmý (obrázok 1b oproti obrázku 2b). Keď sa použije samotný, ani refludan, ani kyselina tranexamová neovplyvnili skupinu cirkulujúcich HSPC.

Počas mobilizácie vyvolanej G-CSF a AMD3100 sa aktivujú všetky tri evolučne staré proteolytické kaskády.

Na podporu našich údajov o mobilizácii in vivo sme v prítomnosti alebo neprítomnosti inhibítorov CoaC a FibC priamo merali aktiváciu oboch kaskád v PB myší, ktoré boli mobilizované pomocou G-CSF alebo AMD3100.

Obrázok 3 ukazuje, že podávanie G-CSF (obrázok 3A) alebo AMD3100 (obrázok 3B) významne znižuje PT aj APTT a AMD3100 významne zvyšuje trombín / antitrombín, čo naznačuje aktiváciu CoaC. Podávanie G-CSF tiež zvýšilo koncentráciu trombín / antitrombínových komplexov v PB, hoci toto zvýšenie nebolo významné. Súčasne, ako je znázornené na obrázku 3A, AMD3100 signifikantne aktivoval FibC, čo bolo pozorované zvýšením koncentrácie plazmínu / antiplazmínu. Nakoniec, aktivácia ComC počas mobilizácie indukovanej G-CSF- a AMD-3100, ako už bolo uvedené, bola inhibovaná po podaní refludanu a / alebo kyseliny tranexámovej (obrázok 3C).

Image

Dôkazy o aktivácii CoaC, FibC a ComC počas mobilizácie HSPC. ( A a B ) Aktivácia CoaC u WT myší mobilizovaných pomocou G-CSF alebo AMD3100, merané znížením protrombínového času (PT) (a), APTT (b; * P <0, 05, ** P <0, 01) a zvýšením hladiny komplexov trombín / antitrombín (TAT) v sére (c; * P <0, 005). (d) Aktivácia FibC u WT myší mobilizovaných pomocou G-CSF alebo AMD3100, merané zvýšením hladiny séra a komplexov plazmin / antiplazmín (PAP). * P <0, 005. Sú to kombinované výsledky z dvoch nezávislých experimentov ( n = 10 myší / skupina). ( C a D ) Aktivácia ComC meraná zvýšením koncentrácie fragmentov štiepenia C5a v PB (kontrolné hodnoty u nemobilizovaných myší boli 1, 0). Sú to kombinované výsledky z dvoch nezávislých experimentov ( n = 6 myší / skupina). * P <0, 005.

Obrázok v plnej veľkosti

diskusia

Mechanizmy, ktoré regulujú mobilizáciu HSPC, ešte stále nie sú dobre známe a relatívne veľký počet pacientov, najmä tých, ktorí boli predtým liečení chemoterapiou, je slabým mobilizátorom v reakcii na G-CSF. 7, 18, 19, 20

Bolo publikované, že podávanie G-CSF alebo AMD3100 indukuje vysoko proteolytické mikroprostredie v BM kvôli niekoľkým proteolytickým enzýmom uvoľňovaným aktivovanými granulocytmi a monocytmi. 21, 22 Preto je všeobecne známe, že prvý krok pri uvoľňovaní HSPC z ich výklenkov v BM do PB súvisí so zoslabením interakcie medzi hlavnými receptormi navádzania / retencie (CXCR4 a VLA-4) exprimovanými na povrchu. HSPC s ich zodpovedajúcimi ligandami (SDF-1 a VCAM-1) v medzerách BM. 1, 2, 3, 4, 5 To by sa mohlo dosiahnuť pôsobením vyššie uvedených proteolytických enzýmov alebo blokádou so špecifickými molekulami blokujúcimi receptor (napríklad AMD3100). Úloha proteolytických enzýmov exprimovaných BM, ako sú neutrofilná elastáza, katepsín-G alebo metaloproteinázy 17, však bola spochybnená zisteniami, že knockoutovanie niektorých z týchto enzýmov má iba zanedbateľný vplyv na mobilizačný proces 17, čo tiež naznačuje, existencia kompenzačných mechanizmov zahŕňajúcich iné proteolytické enzýmy. Predpokladáme, že tu môžu hrať úlohu proteázy generované pri aktivácii CoaC a FibC. V skutočnosti bolo navrhnuté, že CoaC a FibC zohrávajú úlohu pri uvoľňovaní HSPC z BM; 13, 14, 15, molekulárne mechanizmy tohto javu však ešte stále nie sú úplne objasnené.

Je dobre známe, že tri evolučne staré kaskády proteolytických enzýmov, ComC, CoaC a FibC, sú aktivované v PB počas niekoľkých udalostí, pri ktorých sa HSPC uvoľňujú z BM do PB (napríklad zápal alebo namáhavé cvičenie). Všetky tieto kaskády tiež vykazujú cirkadiánne rytmy v aktivácii z dôvodu poklesu pH krvi počas hlbokého spánku v noci a sú pravdepodobne zodpovedné za cirkadiánne zmeny v obchodovaní s HSPC v PB. 23, 24 Preto sa okrem cirkadiánnych zmien v tonuse vegetatívneho nervového systému cirkadiánna aktivácia ComC, CoaC a FibC pravdepodobne podieľa aj na cirkadiánnom uvoľňovaní HSPC z BM do PB. 6 Čo je tiež dôležité, tri kaskády vykazujú výrazné presluchy kvôli vzájomnej krížovej aktivácii proteolytickými enzýmami uvoľnenými napríklad počas zápalu. 10

Už sme predtým informovali o dôležitosti ComC pri mobilizácii vyvolanej G-CSF a AMD3100. 4 Ukázali sme tiež, že myši defektné v C3, ktoré sú proximálnou zložkou ComC, sú ľahkými mobilizátormi. 12 Tento jav sme vysvetlili nedostatkom štiepenia C3 a tvorby C3a, ktorý sa zvyšuje kvôli takzvanému aktivačnému účinku, retenčným signálom sprostredkovaným osou CXCR4 – SDF-1 pre HSPC v BM, čím sa zabráni nekontrolovanému uvoľňovaniu týchto buniek do PB., Na rozdiel od zvierat C3 - / - majú myši defektné v C5, ktorý je distálnou zložkou ComC, hlboký defekt v mobilizácii HSPC. 9 Toto pozorovanie sa vysvetľuje skutočnosťou, že fragment C5 štiepenia (C5a) generovaný v mikroprostredí BM vo vnútri bariéry BM-PB je zodpovedný za zvýšenie uvoľňovania proteolytických enzýmov z myeloidných buniek, ktoré zoslabujú SDF-1 – CXCR4 a VLA4 – VCAM. -1 retenčné signály v medzerách BM. Ďalej, C5a generovaný v sínusoidoch BM je silným chemoatraktantom pre granulocyty a monocyty, prvé bunky, ktoré z BM unikajú, a tak permeabilizujú bariéru BM-PB, čo uľahčuje následný výstup HSPC, ktoré exprimujú proteolytické enzýmy v ∼ 100-krát nižšej hladine., 4, 9 Ďalej, ďalší fragment C5 štiepenia, C5b, sa podieľa na tvorbe C5b-C9 (komplex útoku na membránu), ktorý môže zvýšiť hladinu PB sfingozín-1-fosfátu, čo je rozhodujúci priamy chemoatraktant v PB, ktorý riadi výstup HSPC., Zlyhanie myší s deficitom C5 pri tvorbe komplexu C5a a membránového útoku teda vysvetľuje, prečo sú tieto zvieratá slabými mobilizátormi. 9

Ak vezmeme do úvahy, že C3 je potrebný na tvorbu C5 konvertázy, enzýmu, ktorý štiepi C5 počas aktivácie ComC, dá sa očakávať, že myši s deficitom C3, podobne ako zvieratá s deficitom C5, by boli slabými mobilizátormi. Ako je však uvedené vyššie, nie je tomu tak. Aby sme sa zamerali na to, prečo sú myši C3 - / - napriek tomu, že sú v generácii C5 konvertázy ľahké, mobilizátory, zvážili sme zapojenie alternatívnych proteolytických dráh, ktoré poskytujú aktivitu podobnú C5 konvertáze, a tak štiepia / aktivujú C5 u myší C3 - / -., Preto sme sa zamerali na CoaC a FibC s vedomím, že tak trombín, ako aj plazminogén môžu vykazovať aktivitu podobnú C5 konvertáze, ako je demonštrované v niektorých experimentálnych podmienkach. 10 V našej predchádzajúcej správe sme preukázali, že inhibícia CoaC refludanom negatívne ovplyvňuje mobilizáciu indukovanú G-CSF u zvierat C3 - / -, čo naznačuje zapojenie CoaC do tohto procesu. 16 Ako je uvedené vyššie, na podporu tejto interpretácie sa ukázalo, že trombín a plazmín mobilizujú HSPC pri podaní in vivo . Pokiaľ je nám známe, prvýkrát sme preukázali, že podávanie G-CSF a AMD3100 súčasne aktivuje CoaC, ComC a FibC a viac objasňuje úlohu CoaC a FibC v procese mobilizácie. Konkrétne, na základe pozorovania, že štiepenie C5 je rozhodujúce pre výstup HSPC z BM, 9 tu ukazujeme, že ako trombín, ako produkt aktivovaného CoaC, tak plazmín, ako produkt aktivovaného FibC, poskytujú C5 konvertázu podobnú aktivita na uľahčenie štiepenia C5 ako zásadný krok pri mobilizácii HSPC (obrázok 4).

Image

Predpokladané presluchy medzi ComC, CoaCand FibC pri mobilizácii HSPC, ktoré sa vysvetľujú každým poskytovaním aktivity C5 konvertázy. Štiepenie C5 a uvoľňovanie C5a a C5b je rozhodujúce pre výstup HSPC z BM. 9 (ľavý panel) G-CSF a AMD3100 aktivujú ComC, CoaC a FibC, čo vedie k tvorbe C5 konvertázy (prostredníctvom ComC), aktivity C5 konvertázy podobnej trombínu (cez CoaC) a aktivity C5a konvertázy plazminom ( prostredníctvom FibC). (Pravý panel) Aktivita podobná C5 konvertáze kvôli aktivácii CoaC a tvorbe trombínu, ako aj aktivácii FibC a tvorbe plazmínu, ktorý kompenzuje nedostatok C3 a teda nedostatok „klasickej“ C5 konvertázy v C3 - / - myši. Táto substitúcia umožňuje účinnú mobilizáciu HSPC u myší C3 - / - napriek defektu v aktivácii proximálnej (upstream od C5) časti ComC. * označuje zapojenie ďalších potenciálnych ciest. Na podporu tohto majú faktory IX, X a XI tiež aktivitu C5 konvertázy. 10

Obrázok v plnej veľkosti

Tieto výsledky teda potvrdzujú, že C5 sa môže aktivovať / štiepiť spôsobom závislým od trombínu a plazmínu 10 v neprítomnosti klasickej C3-dependentnej, C5 konvertázy generovanej ComC - a tak tak trombín aj plazmín môžu poskytovať „C5-konvertázu- „aktivita počas mobilizácie HSPC“. Ako model tohto účinku sme použili zvieratá C3 - / -, ktoré sú ľahko mobilizujúce, aj keď naše údaje tiež podporujú trombín a plazmín, ktoré poskytujú aktivitu podobnú C5-konvertáze u zvierat WT mobilizovaných G-CSF a AMD3100. Pretože však inhibícia obidvoch proteáz úplne neinhibovala výstup HSPC z BM, je potrebné zvážiť zapojenie ďalších zložiek CoaC a FibC do poskytovania aktivity podobnej C5 konvertáze. Na podporu tohto záveru sa C5 môže štiepiť aj niekoľkými ďalšími proteázami uvoľňovanými z granulocytov a monocytov nesúvisiacich s CoaC a ComC, ako je katepsín, matricová metaloproteináza (MMP) -2 a MMP-9. 17

Na záver, údaje prezentované v tejto práci prvýkrát demonštrujú existenciu presluchu medzi tromi evolučne starými proteolytickými kaskádami, ComC, CoaC a FibC, pri mobilizácii HSPC poskytovaním aktivity C5 konvertázy. Potrebná je ďalšia štúdia, aby sa zistilo, či proteolytické enzýmy z týchto kaskád prenikajú aj cez hematoencefalickú bariéru a ovplyvňujú retenčné signály sprostredkované CXCR4 – SDF-1- a VLA-4 – VCAM-1 pre HSPC. Je veľmi pravdepodobné, že proteolytická aktivita týchto kaskád kompenzuje nedostatok proteáz odvodených od granulocytov / monocytov v mobilizačných štúdiách na zvieratách s nedostatkami v týchto enzýmoch. Nakoniec, keďže všetky tieto kaskády sa aktivujú neskoro v noci z dôvodu poklesu pH v PB, je potrebné ďalšie štúdie, aby sa objasnilo ich zapojenie do cirkadiánneho uvoľňovania HSPC z BM do PB. Nakoniec sú tieto pozorovania relevantné pre mobilizáciu pacientov liečených liekmi, ktoré potenciálne interferujú s CoaC / FibC.