Metyltransferázy sprostredkujú bunkovú pamäť genotoxického poškodenia onkogén

Metyltransferázy sprostredkujú bunkovú pamäť genotoxického poškodenia onkogén

Anonim

predmety

  • rakovina
  • Epigenetická pamäť
  • Genomická nestabilita
  • transferázy

abstraktné

Charakterizácia priamych účinkov činidiel poškodzujúcich DNA ukazuje, ako lézie DNA vedú k špecifickým mutáciám. Avšak sérum od pacientov, ktorí prežili Hirošimu, od likvidátorov černobylu a od pacientov s rádioterapiou, môže vyvolať klastogénny účinok na naivné bunky a preukázať nepriamu indukciu genomickej nestability, ktorá pretrváva roky po expozícii. Takéto nepriame účinky sa neobmedzujú iba na ionizujúce žiarenie, pretože chemické genotoxíny tiež vyvolávajú dedičné a prenosné fenotypy genómovej nestability. Aj keď je takáto nepriama indukcia genómovej nestability dobre opísaná, základný mechanizmus zostal záhadný. Tu ukazujeme, že myšie embryonálne kmeňové bunky vystavené y-žiareniu nesú účinky urážky celé týždne. Konkrétne upravené médium z potomstva exponovaných buniek môže indukovať poškodenie DNA a homológnu rekombináciu v naivných bunkách. Najmä bunky exponované kondicionovaným médiám tiež vyvolávajú destabilizujúci účinok na svoje susedné bunky, čím demonštrujú prenos genomickej nestability. Ďalej ukazujeme, že základný základ pre pamäť urážky je úplne závislý od dvoch hlavných DNA cytozínmetyltransferáz, Dnmt1 a Dnmt3a. Cielené prerušenie týchto génov v exponovaných bunkách úplne eliminuje prenos genomickej nestability. Okrem toho prechodná inaktivácia Dnmt1 pomocou tet potlačujúcej alely vymaže pamäť urážky, čím chráni susedné bunky pred nepriamou indukciou genomickej nestability. Ukázali sme teda, že jediná expozícia môže viesť k dlhodobým účinkom destabilizujúcim genóm, ktoré sa šíria z bunky do bunky, a poskytujeme špecifický molekulárny mechanizmus pre tieto pretrvávajúce vedľajšie účinky. Súhrnne naše výsledky ovplyvňujú súčasné chápanie rizík vyplývajúcich z vystavenia toxínom a navrhujú spôsoby intervencie na potlačenie genomickej nestability u ľudí vystavených karcinogénnym genotoxínom.

úvod

Je známe, že činidlá poškodzujúce DNA, ako napríklad ionizujúce žiarenie a chemické genotoxíny, môžu priamo indukovať mutácie, ktoré zase podporujú rakovinu a starnutie (Friedberg et al., 2006; Hoeijmakers, 2009). Menej dobre zrozumiteľné, ale stále viac oceňované, sú nepriame účinky takýchto expozícií na genomickú stabilitu. Napríklad bunky môžu trpieť pretrvávajúcou, zvýšenou frekvenciou mutácií, mnohými generáciami buniek po pôvodnej expozícii (Little a kol., 1990; Kadhim a kol., 1992). Okrem toho naivné bunky kultivované v prítomnosti potomkov exponovaných buniek podobne vykazujú zvýšenú frekvenciu genetických zmien (Nagasawa a Little, 1992; Zhou a kol., 2000; Huo a kol., 2001). Tieto nepriame účinky expozície látkam poškodzujúcim DNA sa bežne opisujú ako pretrvávajúce alebo vedľajšie účinky (Bender a Gooch, 1962; Morgan, 2003).

Bolo pozorované, že rôzne fenotypy pretrvávajú dlho po počiatočnej genotoxickej expozícii. Klasickým príkladom je oneskorená smrť reprodukčných buniek a znížená účinnosť pokovovania, ktorá môže po expozícii pretrvávať viac ako 50 generácií (Chang a Little, 1992). Okrem toho de novo genetické zmeny sa vyskytujú po expozícii mnohých bunkových deleniach (Pampfer and Streffer, 1989; Kadhim a kol., 1992; Seymour a Mothersill, 2004). Tak ako pri pretrvávajúcich účinkoch, aj s vedľajším účinkom sa spája mnoho rôznych fenotypov. Naivné vedľajšie bunky kultivované buď v prítomnosti buniek, ktoré boli predtým exponované genotoxickému činidlu, alebo v médiu z exponovaných kultúr, sú náchylné na genomickú nestabilitu, toxicitu a zhubnú transformáciu (Nagasawa a Little, 1992; Zhou a kol., 2000; Huo a kol., 2001; Lewis a kol., 2001; Little, 2003; Nagar a kol., 2003).

Pochopenie mechanizmov podieľajúcich sa na pretrvávajúcich a prenosných odpovediach na genotoxíny je jednoznačne dôležité pre ľudské zdravie, vzhľadom na všadeprítomnú prítomnosť látok poškodzujúcich DNA endogénne, v našom prostredí a na klinike. Od počiatočného objavenia perzistentných a vedľajších fenotypov súvisiacich s genotoxicitou sa základné príčiny, fyziologický vplyv a mechanická etiológia týchto reakcií intenzívne študovali (Morgan a Sowa, 2005; Mothersill a Seymour, 2005, 2006). Tradične sa skúmali perzistentné a vedľajšie fenotypy v reakcii na vysoké dávky ionizujúceho žiarenia (Mothersill a Seymour, 2001). Nedávno boli tieto fenotypy tiež generované neionizujúcim žiarením, napríklad ultrafialovým žiarením (Limoli a kol., 1998; Mothersill a kol., 1998), reaktívnymi druhmi kyslíka a dusíka (Azzam a kol., 2002). ; Dickey a kol., 2009), cytokíny (Dickey a kol., 2009) a ďalšie genotoxické, chemické expozície (Rugo, 2005). Pretože endogénne generované chemické druhy (napríklad cytokíny a reaktívne druhy kyslíka a dusíka) a exogénne látky, ktorým sú bunky fyziologicky vystavené (napríklad ultrafialové a nízkodávkové infračervené žiarenie), sú schopné iniciovať perzistentné a podobné fenotypy, je rozumné predpokladať, že tieto odpovede predstavujú normálne, fyziologicky relevantné bunkové odpovede na stresory. S týmto hľadiskom sú v súlade pozorovania perzistentných a okolitých fenotypov nielen v bunke, ale aj v tkanive (Pant a Kamada, 1977; Watson a kol., 2000; Goldberg a Lehnert, 2002; Mothersill a kol., 2002; Koturbash, 2006) a dokonca organizačnú úroveň organizácie (Mothersill et al., 2007). Ďalej sa zdá, že tieto reakcie sú evolučne konzervované v rôznych kráľovstvách a druhoch (Yang et al., 2008).

Intenzívny záujem o základný mechanizmus vedľajšieho účinku vyvolal štúdie, ktoré odhalili mnohé látky schopné indukovať perzistentné a vedľajšie fenotypy, ako je uvedené vyššie. O mechanizme, ktorým si bunky zachovávajú a následne prenášajú „pamäť“ urážky, ktorá sa stáva genomicky nestabilnou dlhú dobu po expozícii, je však oveľa menej známe. Predchádzajúce práce v našom laboratóriu ukázali, že genomická nestabilita bola prenosná z jednej bunky do druhej (to znamená, že divák môže vyvolať genómovú nestabilitu v naivnej bunke počas viacerých generácií) (Rugo, 2005). Tento prenos genomickej nestability, hoci naznačuje dedičnosť, zjavne nie je v súlade s genetickým dedičstvom. Naše zistenia a súvisiace pozorovania iných (Lorimore a kol., 2003; Kovalchuk a Baulch, 2008) teda naznačujú, že pretrvávajúce a vedľajšie účinky by sa mohli šíriť doposiaľ neznámym epigenetickým mechanizmom.

Epigenetické mechanizmy dedičnosti zahŕňajú metyláciu DNA, modifikáciu histónu a funkcie určitých nekódujúcich RNA (Goldberg et al., 2007). Dôležité je, že metylácia DNA sa podieľa na dedičných, pretrvávajúcich zmenách fenotypu. Napríklad sa zistilo, že pretrvávajúca a dediteľná zmena farby srsti a udelená rezistencia voči obezite u potomstva samíc myší, ktoré boli počas gravidity kŕmené genisteínom, je závislá od metylácie DNA (Dolinoy et al., 2006). Tu ukazujeme, že DNA metyltransferázy (MTázy) (DNMTs), enzýmy zodpovedné za epigenetickú metyláciu cicavčej DNA, sprostredkujú propagáciu fenotypu nestability po expozícii genotoxínu. Konkrétne sme zistili, že DNA MTázy 1 a 3a sprostredkovávajú pamäť myších embryonálnych kmeňových (ES) buniek vystavenia ionizujúcemu žiareniu.

Výsledky a diskusia

Ionizujúce žiarenie má veľký spoločenský význam v kontexte životného prostredia aj kliniky. Aby sa zistilo, či y-žiarenie vedie k pretrvávajúcej prenosnej nestabilite v ES bunkách, bolo poškodenie DNA hodnotené u divákov. Naivné bunky, označené ako primárne okolostojace osoby (obrázok la), ktoré zdieľali médiá s bunkami pochádzajúcimi z ožiarených kultúr, vykazovali zvýšené poškodenie DNA (obrázok 1b), zatiaľ čo naivné bunky, ktoré zdieľali médiá s falošne ožiarenými bunkami, nevykazovali žiadne zvýšenie poškodenia DNA testom komét. Na testovanie prenosu tohto poškodenia DNA sa druhá skupina naivných buniek divokého typu (WT) označená ako sekundárne okolostojace osoby kultivovala spolu s primárnymi okolostojacimi (obrázok la). Tieto sekundárne okolostojace osoby mali zvýšené poškodenie DNA, keď boli vystavené médiu z primárnych okoloidúcich ožiareným bunkám (obrázok 1c), čím demonštrovali prenos genomickej nestability indukovanej žiarením z exponovaných buniek na naivné bunky (primárne okolostojace osoby) na naivné bunky (sekundárne okolostojace osoby).

Image

Pretrvávajúca a prenosná indukcia genomickej nestability. ( a ) Ožiarené (alebo falošne ožiarené) cieľové ES bunky sa kultivujú počas 3 týždňov. Počas 3 týždňov sa bunky pasážovali trikrát týždenne pri hustotách 0, 5 - 2 x 106 buniek na 55 mm2 misku. Po 3 týždňoch 6 × 104 naivných buniek WT ES následne zdieľalo médium s potomstvom cieľových buniek ES po dobu 5 dní (aby sa vytvorili primárne okolostojace osoby). Primárne okolostojace osoby sa potom kultivovali ďalšie 3 týždne. Naivné bunky WT ES potom zdieľali médiá s potomkami primárnych okolostojacich (aby sa vytvorili sekundárne okolostojace osoby). Médiá boli zdieľané prostredníctvom kokultúry, s použitím 1 um transwell vložiek (Corning, Corning, NY, USA), alebo vystavením kondicionovanému médiu (filtrované (0, 25 μm); 1: 1, čerstvé médium: kondicionované médium). ES bunky boli vystavené ionizujúcemu žiareniu (3 Gy) s použitím zdroja Co-60 (73 cGy / min). Poškodenie DNA bolo hodnotené testom s alkalickou kométou (Olive a Banath, 2006) u primárnych ( b ) a sekundárnych ( c ) okolostojacich. Pre všetky analýzy komét sa analyzovalo> 100 nukleoidov na jednu podmienku s použitím kometu 5.5 (Andor Technology, Belfast, Írsko) a hodnoty P sa vytvorili dvojsmerným Mann-Whitneyovým testom. Pri štúdiách komét predstavujú políčka kvartily, fúzy označujú 10. a 90. percentily a uvádza sa medián. Pre všetky štúdie boli údaje kombinované z troch alebo viacerých nezávislých experimentov.

Obrázok v plnej veľkosti

Aby sme určili, či pretrvávajúca nestabilita vyplýva z epigenetických zmien závislých od MTázy, využili sme skutočnosť, že bunky ES nevyžadujú na životaschopnosť metyláciu genómu a sú ľahko kultivované po rozrušení troch hlavných DNA MTáz: Dnmt1, Dnmt3a a Dnmt3b (Tsumura, 2006). Počas normálneho vývoja, Dnmt3a a Dnmt3b de novo MTázy katalyzujú prenos metylovej skupiny z S-adenozylmetionínu do 5 polohy cytozínu v miestach CpG (Chen, 1991). Metylácia sa udržiava primárne prostredníctvom aktivity Dnmt1, ktorá efektívne metyluje hemimetylované miesta CpG (Stein, 1982). Dnmt1 je nevyhnutný pre dedičné, epigeneticky regulované zmeny v expresii génov, ktoré sú kľúčové pre diferenciáciu a vývoj (Li, 1992). Aby sme otestovali možnú úlohu MTáz v bunkovej pamäti urážky, analyzovali sme, či Dnmt1 - / -; Dnmt3a - / -; Bunky Dnmt3b - / - (dar M. Okano) boli schopné zapamätať si a preniesť genomickú nestabilitu po y-žiarení. Výsledky ukazujú, že potomci ožiareného Dnmt1 - / -; Dnmt3a - / -; Bunky Dnmt3b - / - neboli schopné indukovať poškodenie DNA testom komét v susedných bunkách v porovnaní s bunkami WT (obrázok 2a).

Image

yIR nevedie k pretrvávajúcej indukcii genómovej nestability u primárnych okoloidúcich na bunky Dnmt1 - / - Dnmt3a - / - Dnmt3b - / -. Poškodenie DNA pomocou testu komét ( a ) a SCE ( b ) v naivných WT ES bunkách vystavených médiu z WT a Dnmt1 - / -, Dnmt3a - / - a Dnmt3b - / - buniek. Experimentálny návrh je na obrázku 1. SCE boli spočítané pre ~ 80 nátierok / stav, ako už bolo opísané (Engelward a kol., 1996). V štúdiách SCE je uvedený medián s medzikvartilovým rozsahom a hodnoty P boli získané dvojstranným t- testom.

Obrázok v plnej veľkosti

Jeden z prvých opisov vedľajšieho účinku v kultivovaných bunkách odhalil, že keď bolo ožiarených asi 1% jadier, viac ako 30% buniek malo zvýšenú homológnu rekombináciu, detekovanú ako výmena sesterských chromatidov (SCE) (Nagasawa a Little, 1992). Okrem toho ionizujúce žiarenie indukuje pretrvávajúce zvýšenie homológnej rekombinácie (Huang a kol., 2007). Preto sme sa pýtali, či sú SCE indukované potomstvom ožiarenej WT a Dnmt1 - / -; Dnmt3a - / -; Dnmt3b - / - bunky. Naivné bunky skutočne vykazovali významné zvýšenie ( P <0, 0001) vo frekvencii SCE, keď zdieľali médiá s potomkami ožiarených kultúr (obrázok 2b). Avšak, tam bol len veľmi mierny, ale významný ( P = 0, 0168), nárast SCE, keď boli ožiarené bunky Dnmt1 - / -; Dnmt3a - / -; Bunky Dnmt3b - / - v porovnaní s falošne ožiarenými Dnmt1 - / -; Dnmt3a - / -; Dnmt3b - / - bunky. Je zaujímavé, že SCE boli zvýšené v bunkách, ktoré zdieľali médiá s neožiareným Dnmt1 - / -; Dnmt3a - / -; Dnmt3b - / - ES bunky, v porovnaní s bunkami, ktoré zdieľali médiá s neožiarenými WT ES bunkami (obrázok 2b). Vzhľadom na to, že bunky Dnmt1 - / - sú genómovo nestabilné (Chen a kol., 1998; Kim a kol., 2004), Dnmtl - / -; Dnmt3a - / -; Bunky Dnmt3b - / - ES môžu byť podobne nestabilné, a teda môžu vyvolávať prenosné reakcie, analogické účinkom ožarovania. Bez ohľadu na to potomstvo ožiareného Dnmt1 - / -; Dnmt3a - / -; Bunky Dnmt3b - / - sú menej schopné ako bunky WT indukovať genomickú nestabilitu v naivných susedných bunkách, čo ukazuje, že jedna alebo viac MTáz sú nevyhnutné pre pretrvávajúcu nestabilitu indukovanú žiarením.

Na rozlíšenie úloh jednotlivých MTáz sme analyzovali ES bunky nesúce cielené prerušenia každej MTázy (dar E Li) (Lei a kol., 1996; Okano a kol., 1999). Bunky s deficitom MTázy majú normálnu citlivosť na radiačnú toxicitu (údaje nie sú uvedené). Je zaujímavé, že y-žiarenie nemalo žiadny účinok na SCE v primárnych okolostojacich ožiarených bunkách Dnmt1 - / - v porovnaní s okolostojacimi na neožiarené bunky Dnmt1 - / - (obrázok 3). Neschopnosť buniek Dnmt1 - / - udržať dedičnú fenotypovú zmenu je v súlade s ich hypomethylovaným fenotypom (Lei et al., 1996). Okrem toho Dnmt1 - / - bunky indukujú homológnu rekombináciu v susedných bunkách, dokonca aj bez ožiarenia, čo je konzistentné s ich fenotypom nestability (Chen a kol., 1998; Kim a kol., 2004). Hoci Dnmt1 je udržiavacia MTáza, je možné, že schopnosť Dnmt1 vykonávať de novo metyláciu v reakcii na poškodenie DNA (Mortusewicz et al., 2005) prispieva k prenosnej nestabilite. Podobne ako bunky Dnmt1 - / - bunky Dnmt3a - / - neprenášali genomickú nestabilitu (obrázok 3), čo naznačuje, že de novo metylácia sprostredkovaná Dnmt3a je potrebná na to, aby si bunky pamätali a preniesli nestabilný fenotyp. Je zaujímavé, že rovnako ako v prípade buniek Dnmt1 - / - aj bunky Dnmt3a - / - spôsobili zvýšenie ( P <0, 0001) v SCE pri potlačení buniek WT v neprítomnosti žiarenia v porovnaní s hladinami SCE v okolitých WT na neožiarené bunky WT. Nakoniec, na rozdiel od Dnmt1 a Dnmt3a , Dnmt3b nebol nevyhnutný pre prenosnú nestabilitu, pretože nedostatok v tomto géne stále vyústil do prenosu fenotypu nestability (obrázok 3).

Image

Dnmt1 a Dnmt3a sú potrebné na pretrvávajúcu indukciu homológnej rekombinácie v naivných, primárnych okolitých ES bunkách. SCE v naivných WT ES bunkách vystavených médiu z yIR (a falošne ožiarených) WT, Dnmt1 - / -, Dnmt3a - / - a Dnmt3b - / - cieľové populácie ES buniek. Dizajn a analýza pozri v obrázkoch 1 a 2.

Obrázok v plnej veľkosti

Pozorovanie, že genomická nestabilita je indukovaná neožiarenými Dnmt1 - / - a Dnmt1 - / -; Dnmt3a - / -; Bunky Dnmt3b - / - navrhli možný prah, ktorý zabraňuje ďalšej indukcii nestability po ožiarení. Predpokladali sme, že prechodná strata Dnmt1 môže zabrániť pamäti genotoxickej expozície a zároveň chrániť okolostojacich pred nestabilitou v dôsledku straty Dnmt1. Na otestovanie tejto hypotézy sme využili myšie ES bunky nesúce tetracyklicky represívnu Dnmt1 alelu (Borowczyk et al., 2009). 3 dni po liečbe doxycyklínom bol Dnmtl nedetegovateľný a do 3 dní po odstránení doxycyklínu sa obnovila expresia Dnmtl (obrázok 4a). Aby sa potlačila expresia Dnmtl pred, počas a po ožarovaní, pridali sme doxycyklín 3 dni pred ožiarením a udržali sme ho 7 dní. Doxycyklín sa potom odstránil, aby sa obnovila expresia Dnmtl (obrázok 4a). V súlade s predchádzajúcimi výsledkami (obrázky 2 a 3) indukovali potomci ožiarených WT buniek homológnu rekombináciu v susedných bunkách. Avšak za podmienok, keď bol Dnmt1 prechodne potlačený, potomkovia ožiarených buniek neboli schopní indukovať homológnu rekombináciu v susedných bunkách (obrázok 4b). Je dôležité, že na rozdiel od buniek, ktoré nesú prerušené alely Dnmt1 , bunky prechodne potlačené na Dnmt1 nevyvolávajú nestabilitu v susedných bunkách.

Image

Prechodné potlačenie Dnmt1 chráni pred genomickou nestabilitou indukovanou žiarením. ( a ) Doxycyklín-dependentná represia Dnmt1 v myšacích ES bunkách vyhodnotená pomocou Western blotu. ( b ) SCE v primárnych okolostojacich normálnych a prechodne deficitných bunkách Dnmt1. ( c ) SCE v naivných (sekundárnych okoloidúcich) bunkách vystavených médiu od primárnych okoloidúcich normálnym bunkám a prechodne deficitným bunkám Dnmt1. Analýza údajov podľa popisu pre obrázok 2.

Obrázok v plnej veľkosti

Prenosnosť genomickej nestability prostredníctvom zdieľaných médií má dôležité dôsledky pri zvažovaní potenciálnych tkanivových odpovedí in vivo . Aby sme preskúmali prenosnosť, študovali sme druhotných okoloidúcich. Primárne okolostojace osoby boli schopné indukovať homológnu rekombináciu v naivných bunkách iba vtedy, ak ožiarené cieľové bunky mali normálnu expresiu Dnmtl (obrázok 4b). Preto prechodné potlačenie Dnmt1 zabránilo prenosu nestability tak na naivných primárnych okoloidúcich, ako aj na ich sekundárnych susedných okoloidúcich.

Charakterizácia základných príčin genomickej nestability je základom v etiológii rakoviny, prevencii predčasného starnutia a pochopenia rizík vystavenia. Je čoraz jasnejšie, že nepriame mechanizmy indukcie mutácií, ktoré zahŕňajú zmeny bunkového správania, môžu okrem priamo vyvolaných lézií DNA viesť k zvýšenému riziku mutácií spôsobujúcich ochorenie niekoľko mesiacov alebo dokonca rokov po expozícii (Pant a Kamada, 1977; Mothersill a Seymour, 2001; Lorimore a kol., 2003; Morgan, 2003; Maxwell a kol., 2008). Okrem toho aspoň jedna štúdia naznačuje, že rozsah poškodenia DNA vyvolaného vedľajšími osobami môže byť taký veľký ako rozsah pôvodnej expozície (Dickey et al., 2009).

Aj keď tu opísané štúdie nespochybňujú presný mechanizmus, ktorým vedie metylácia DNA k pretrvávajúcim fenotypom okoloidúcich, je možné, že zmeny v génovej expresii sprostredkované DNA MTázami (Hermann et al., 2004) spôsobujú, že bunky vylučujú faktory, ktoré ovplyvňujú genomická stabilita. Konkrétne je známe, že poškodenie DNA mení aktivitu Dnmt1 a Dnmt3a (Mortusewicz a kol., 2005; Maltseva a Gromova, 2009) a môže tiež meniť profily sekrécie (Rodier a kol., 2009). Ďalej je známe, že bunky, ktoré vylučujú TNF-a, oxid dusnatý a TGF-P, môžu indukovať poškodenie DNA v okolitých bunkách (Dickey a kol., 2009; Burr a kol., 2010). Takže v dôsledku vystavenia sekrétovaným genotoxickým druhom by mohli okolité bunky prijať metylačný vzorec podobný tomu, aký má cieľová bunka, a tak demonštrovať a prenášať vedľajší fenotyp. Pamäť genotoxického poškodenia by sa preto štrukturálne uložila v DNA vo forme vzorov metylácie DNA, ktoré sú vytvárané a udržiavané DNA MTázami (napríklad Dnmt1 a Dnmt3a). Propagácia fenotypu okoloidúcich by sa potom mohla uskutočniť zmenou sekrečného profilu poškodenej bunky. Je zaujímavé, že v normálnych tkanivách komunikácia medzi bunkami pomáha kontrolovať bunkové správanie. Vedľajšie účinky môžu podobne odrážať koordinovanú reakciu.

Pozorovanie, že genómová nestabilita sa môže prenášať z bunky do bunky, in vitro (Nagasawa a Little, 1992; Lorimore a kol., 2003; Mothersill a Seymour, 2004) a in vivo (Watson a kol., 2000; Lorimore a kol. ., 2005) otvára možnosť, že po expozícii genotoxínu dôjde k zmenám v genómovej stabilite v celom tkanive, a upozorňuje na možnosť, že pretrvávajúce a vedľajšie účinky sú kritickými rizikovými faktormi choroby. Tu sme demonštrovali, že dve z troch hlavných MTáz, Dnmt1 a Dnmt3a, sú nevyhnutné pre potomkov ožiarených buniek, aby boli schopné preniesť genomickú nestabilitu na naivné bunky. Ďalej sme ukázali, že dočasným vypnutím expresie Dnmt1 je možné úplne vylúčiť prenos genomickej nestability. Zaujímavé a skutočne v súlade s týmito zisteniami sa nedávno preukázalo, že Dnmt1 a 3a majú dôležitú úlohu v neurologickej pamäti a učení (Feng et al., 2010). Toto zistenie, aj keď konkrétne viditeľné v neurónoch, môže predstavovať všeobecný mechanizmus, ktorým bunky ukladajú informácie o genotoxických a iných stimuloch a prispôsobujú sa im.

Záverom, znalosť molekulárneho základu pre prenos genomickej nestability otvára dvere novým zásahom, vrátane potenciálneho podávania Dnmt inhibítorov v spojení s chemoterapiou rakoviny, aby sa zachovala celoplošná genómová stabilita, a tak potlačila sekundárne rakoviny.