Progenitorové bunky výstelky kordu: potenciálny model adipogenézy in vitro | medzinárodný denník obezity

Progenitorové bunky výstelky kordu: potenciálny model adipogenézy in vitro | medzinárodný denník obezity

Anonim

predmety

  • Mezenchymálne kmeňové bunky
  • Obezita
  • Diferenciácia kmeňových buniek

abstraktné

cieľ:

Skúmať vplyv koncentrácií glukózy a inzulínu na diferenciáciu progenitorových buniek pupočníkovej šnúry na bunky podobné adipocytom (ALC).

metódy:

Medzenchymálne bunky s výstelkou kordu (CLMC) boli izolované z explantátu amniotickej membrány ľudskej pupočnej šnúry. CLMC boli podrobené diferenciácii pri rôznych kultivačných podmienkach počas 20 dní. Lipidové kvapôčky boli potvrdené zafarbením Oil Red O. Génové expresie gama receptora aktivovaného proliferátorom adipsínu a peroxizómu ( PPARy ) sa analyzovali pomocou reverznej transkripčnej PCR. Sekrécie leptínu a adiponektínu boli detegované s použitím enzýmovo viazanej imunosorbentovej testovacej súpravy.

výsledky:

CLMC sa stali nepravidelnými bunkami tvaru kvádra, ktoré sa podobajú adipocytom, a farbenie olejom Red O ukázalo prítomnosť lipidových kvapôčok. Génové expresie PPARy a adipsínu boli upregulované. Sekrécie leptínu a adiponektínu naivnými CLMC boli pod limitmi detekcie. Vyzreté ALC kultivované v médiu s nízkym obsahom glukózy významne vylučovali leptín a adiponektín, zatiaľ čo tie v médiu s vysokým obsahom glukózy významne vylučovali iba leptín. Koncentrácia inzulínu ovplyvňuje sekréciu leptínu, ale nie adiponektínu.

záver:

Za rôznych kultivačných podmienok sa CLMC môžu diferencovať na ALC, ktoré sa podobajú adipocytom u jedincov s normálnou hmotnosťou alebo u obéznych jedincov. Tieto ALC majú teda potenciál byť použité ako in vitro model na štúdium adipogenézy a obezity a prípadne ako model objavenia liekov pri metabolických poruchách.

úvod

Výskum v oblasti kmeňových buniek sa v poslednom desaťročí od úspešného vytvorenia línií ľudských kmeňových buniek posunul a posunul. 1 Objavili sa dôkazy, že tieto pluripotentné bunky majú sľubné aplikácie v regeneratívnej medicíne a bunkových terapiách. 2, 3 Etické obavy a kontroverzie týkajúce sa využívania embryonálnych kmeňových buniek boli , žiaľ, hlavnou prekážkou pri výskume a klinických aplikáciách. Multipotentné mezenchymálne progenitorové bunky sú preto atraktívnou alternatívou. Aj keď na nižšej úrovni plasticity v porovnaní s embryonálnymi kmeňovými bunkami, mezenchymálne progenitorové bunky sú dostatočne univerzálne na diferenciáciu na určité bunkové línie, poskytujú klinicky bezpečnejšiu alternatívu a eticky prijateľnú alternatívu. 4

Okrem široko používanej kostnej drene bolo identifikovaných mnoho medzierymových kmeňových buniek, medzi ktoré patrí tukové tkanivo, 5 trabekulárna kosť, 6 plodová voda 7 a Whartonova želé. 8, 9 Zistilo sa, že mezenchymálne kmeňové bunky sa dajú hojne izolovať z ľudskej pupočnej šnúry. Medzenchymálne kmeňové bunky z pupočníkovej šnúry majú funkciu podporujúcu hematopoézu a schopnosť diferencovať sa podobným spôsobom ako mezenchymálne kmeňové bunky pochádzajúce z kostnej drene na osteogénne, chondrogénne, adipogénne a myogénne bunky in vitro . Bunky s výstelkou z pupočníka majú oproti iným zdrojom progenitorových kmeňových buniek obrovské výhody. Je nevyvrátiteľné, že bude existovať neobmedzená zásoba buniek výstelky pupočnej šnúry, pretože narodenie každého dieťaťa je sprevádzané pupočnou šnúrou. Okrem toho sa pupočníková šnúra obvykle vyhodí ako biologický odpad po pôrode dieťaťa a pri odbere pupočnej šnúry nedochádza k žiadnej úmrtnosti. Preto bude menej etické ťažkosti s použitím buniek výstelky pupočníkovej šnúry.

Zvyšujúci sa celosvetový problém obezity si vyžaduje hlbšie pochopenie adipogenézy a nevyhnutnú snahu o zvládnutie poruchy. Použitie mezenchymálnych buniek s výstelkou z pupočníkovej šnúry (CLMC) ako modelu in vitro štúdie adipogenézy nebolo doteraz hlásené. Nedávny zlepšený spôsob izolácie progenitorových buniek z ľudskej pupočnej šnúry bol patentovaný Phanom. Tento spôsob kultivácie buniek pomocou tkanivových explantátov a izolácie pomocou selekcie média je oveľa spoľahlivejší a ľahšie uskutočniteľný na získanie dvoch samostatných populácií mezenchymálnych a epitelových buniek. To umožňuje samostatné špecifické štúdie epitelových a mezenchymálnych progenitorových buniek, a tým rozširuje možnosti bunkovej terapie.

V tejto štúdii sme skúmali účinky koncentrácií glukózy a inzulínu na adipogenézu CLMC izolovaných metódou tkanivového explantátu. Ilustrovali sme, že za rôznych kultivačných podmienok môže byť diferenciácia nasmerovaná smerom k in vitro modelu, ktorý sa podobá adipocytom zdravého jedinca s normálnou hmotnosťou alebo obézneho jedinca.

výsledok

Medzenchymálne bunky s výstelkou kordu

CLMC sú ľahko dostupné z pupočníkovej výstelky, vykazujú vysokú proliferačnú aktivitu a ľahko sa udržiavajú v proprietárnom médiu. Majú vretenovitú fibroblastickú morfológiu, ako je znázornené na obrázku 1. Predchádzajúce údaje ukázali, že sa jedná o multipotentné progenitorové bunky. 11, 12

Image

Mezenchymálne bunky s výstelkou naivnej šnúry.

Obrázok v plnej veľkosti

Morfológia a sfarbenie Oil Red O

Pozorovalo sa, že morfológia CLMC, ktoré boli podrobené diferenciácii, sa zmenila z vretenovitých fibroblastických buniek v deň 0 (obrázok 1) na nepravidelné bunky v tvare kvádrov, ktoré boli podobné adipocytom v deň 20 (obrázok 2). Intenzita zafarbenia Oil Red O vo všetkých štyroch liečených skupinách sa postupne zvyšovala od 1. dňa do 20. dňa, čo naznačuje akumuláciu lipidových kvapiek. V skupinách s nízkym obsahom glukózy viedla vyššia koncentrácia inzulínu k väčšiemu množstvu buniek s akumuláciou lipidov. Rovnaký fenomén bol pozorovaný pre skupiny liečené vysokou glukózou. Veľkosť a miera akumulácie lipidových kvapôčok medzi skupinami s nízkym obsahom glukózy s vysokým obsahom inzulínu a skupinou s vysokým obsahom glukózy s nízkym obsahom inzulínu sa významne nelíšili. Medzi štyrmi liečenými skupinami sa zistilo, že miera akumulácie lipidových kvapôčok v bunkách bola najpomalšia v skupine s nízkym obsahom glukózy a nízko-inzulínu a najrýchlejšia v skupine s vysokým obsahom glukózy s vysokým obsahom inzulínu. Okrem toho lipidové kvapôčky buniek kultivovaných v nízko-glukózovom nízko-inzulínovom adipogénnom médiu boli vo všeobecnosti menšie ako tie, ktoré boli obsiahnuté v vysoko glukózovom vysoko inzulínovom adipogénnom médiu. V deň 20 má skupina s vysokým obsahom glukózy s vysokou hladinou inzulínu najvyššiu intenzitu zafarbenia Oil Red O. V kontrolnej skupine boli pozorované malé kvapky intracytoplazmatických lipidov. Tieto lipidové kvapôčky v naivných CLMC sa líšia od tých, ktoré sa pozorovali v liečebných skupinách s adipogenézou, pretože kvapôčky boli rovnomerne malé, bez toho, aby sa zvyšovali v množstve alebo veľkosti v priebehu 20 dní. Na druhej strane lipidové kvapôčky v skupinách indukovaných diferenciáciou boli omnoho väčšie ako v kontrolnej skupine.

Image

Morfológia buniek a sfarbenie adipogenézy pomocou Oil Red O. ( a - c ) Kontrolná skupina N, ( d - f ) nízko glukóza s nízkym obsahom inzulínu, ( g - i ) nízko glukóza s vysokým obsahom inzulínu, j - l : nízko glukóza s nízkym obsahom inzulínu, m - o : vysoko glukóza s vysokým obsahom inzulínu. V deň 20 bola pozorovaná najvyššia intenzita farbenia na lipidy Oil Red O v skupine s vysokým obsahom glukózy s vysokým obsahom inzulínu, ako je znázornené šípkami. Fotografie boli nasnímané pri nastavení jasného poľa.

Obrázok v plnej veľkosti

Reverzná transkripcia-PCR

Adipsin

V génovej expresii adipsínu došlo k postupnej upregulácii pre všetky skupiny indukované diferenciáciou (obrázok 3). Štatistická analýza signálov intenzity pásma v 20. deň pomocou jednosmernej ANOVA ukázala významný rozdiel medzi kontrolnými a indukovanými skupinami, ale nebol zistený žiadny významný rozdiel v intenzite génovej expresie medzi všetkými skupinami indukovanými diferenciáciou (obrázok 4).

Image

Gélová elektroforéza produktov RT-PCR.

Obrázok v plnej veľkosti

Image

Relatívna intenzita pruhu génovej expresie. Po 20 dňoch diferenciácie jednosmerná ANOVA ukázala, že došlo k významnému zvýšeniu hladiny expresie adipsínu ( a ) a PPARg ( b ) vo všetkých skupinách indukovaných diferenciáciou v porovnaní s kontrolnou skupinou N. Porovnanie Tukeyho párov nepreukázalo žiadne významné rozdiel v úrovni génovej expresie medzi skupinami indukovanými diferenciáciou. Hodnoty sú priemerné ± sem

Obrázok v plnej veľkosti

PPAR

V génovej expresii PPARy došlo k zjavnej upregulácii pre všetky skupiny indukované diferenciáciou (obrázok 3). V kontrolnej skupine sa nepozorovala žiadna génová expresia. Štatistická analýza signálov intenzity pásma v 20. deň pomocou jednosmernej ANOVA ukázala významný rozdiel medzi kontrolnými a indukovanými skupinami, ale nebol významný rozdiel v intenzite génovej expresie medzi všetkými skupinami indukovanými diferenciáciou (obrázok 4). Sekvencia primérov použitá v tejto štúdii rozpoznávala komplementárnu DNA spoločnú pre izoformy y1 a y2.

ELISA

leptín

Limit detekcie sekrécie leptínu testovacou súpravou je 6 pg ml -1 . Množstvo sekrécie naivnými CLMC v 20. deň bolo pod odporúčanými limitmi detekcie (obrázok 5). Analýza údajov pomocou jednocestnej ANOVA ukázala, že nebol významný rozdiel v sekrécii leptínu medzi bunkami inkubovanými v médiu s vysokým obsahom glukózy a bunkami v kontrolnej skupine. Množstvo leptínu vylučovaného vyzretými bunkami podobnými adipocytom (ALC) inkubovaných v skupinách s nízkym obsahom glukózy bolo však významne vyššie ako množstvo v kontrolnej skupine ( P <0, 001). Ďalšia analýza údajov pomocou dvojcestnej ANOVA o vplyve koncentrácií glukózy a inzulínu a potenciálnych interakciách medzi glukózou a inzulínom ukázala, že ich koncentrácie významne ovplyvnili sekréciu leptínu ( P <0, 001 a P <0, 05). Medzi týmito dvoma faktormi ( P > 0, 05) nedošlo k žiadnej významnej interakcii.

Image

Sekrécia adipocytokínov pomocou ELISA v 20. deň. Limity detekcie adiponektínu a leptínu pomocou súpravy ELISA sú 10 pg / ml, respektíve 6 pg / ml. Adiponektín: jednosmerná ANOVA, Tukeyov test preukázal významný rozdiel medzi skupinou s nízko glukózovým adipogénnym a naivným CLMC ( P <0, 001). Obojsmerná ANOVA nepreukázala žiadnu interakciu medzi glukózou a inzulínom ( P > 0, 05). Leptín: jednosmerná ANOVA, Tukeyov test preukázal významný rozdiel medzi skupinou adipogénnych a naivných CLMC s nízkou glukózou ( P <0, 001). Obojsmerná ANOVA ukázala, že koncentrácia inzulínu ( P <0, 05) aj glukózy ( P <0, 001) ovplyvňuje množstvo vylučovaného leptínu, ale tieto dva faktory nemajú žiadne interakcie ( P > 0, 05). Množstvo sekrécie adiponektínu v naivných CLMC, vysoko glukózach s nízkym obsahom inzulínu a vysoko glukózových vysoko inzulínových skupinách bolo pod 10 pg ml- 1 . Množstvo sekrécie leptínu v naivných CLMCs a skupinách s vysokou hladinou glukózy s nízkym obsahom inzulínu bolo pod 6 pg ml -1 . Hodnoty sú stredné ± sem * významný rozdiel.

Obrázok v plnej veľkosti

adiponektínu

Limit detekcie adiponektínu v testovacej súprave je 10 pg ml −1 . Aj keď došlo k slabej detekcii sekrécie adiponektínu naivnými CLMC a ALC inkubovanými v médiu s vysokou glukózou v 20. deň, zistené množstvá boli pod odporúčanými limitmi detekcie (obrázok 5). Analýza údajov pomocou jednosmernej ANOVA ukázala, že rôzne koncentrácie glukózy a inzulínu majú významný vplyv na množstvo vylučovaného adiponektínu. Tukeyov test identifikoval významné rozdiely medzi bunkami v kontrolnej skupine a bunkami v skupinách s nízkym obsahom glukózy ( P <0, 001). Ďalšia analýza údajov pomocou dvojsmernej ANOVA ukázala, že koncentrácia glukózy má významný účinok ( P <0, 001), zatiaľ čo koncentrácia inzulínu nemá významný vplyv na množstvo sekrécie adiponektínu ( P > 0, 05). Medzi týmito dvoma faktormi ( P > 0, 05) nedošlo k žiadnej významnej interakcii.

diskusia

Fyzická a psychická prekážka obezity spojená so sociálnou stigmou vedie mnohých jednotlivcov k tomu, aby hľadali spôsoby, ako zabrániť nadmernej váhe alebo ju zbaviť. Obezita je rizikovým faktorom pre zvýšenú chorobnosť a úmrtnosť iných stavov, ako je diabetes, artritída a kardiovaskulárne ochorenia. Spôsobuje tiež abnormality v endokrinnom systéme a následne nepriaznivý vplyv na reprodukciu. Nepochybne sa adipogenéza a obezita intenzívne študovali na zvieracích modeloch, ako je napríklad model myši ob / ob alebo tubby myši, alebo bunkových líniách, ako napríklad myších bunkových líniách 3T3-L1 alebo F442A. Napriek tomu budú existovať genetické rozdiely medzi zvieratami a ľuďmi, ktoré môžu byť rozhodujúce pre štúdium obezity u ľudí. Okrem toho použitie ľudských predadipocytov z tukového tkaniva nie je ideálne. Tieto bunky, ktoré sa už zaviazali k adipogénnym líniám, majú zníženú proliferačnú schopnosť a nepredvídateľnú variabilitu na základe rôznych darcov a anatomických miest. 13, 14

Použitie mezenchymálnych progenitorových buniek ľudskej kostnej drene na štúdium adipogenézy je v plnom prúde. Tieto typy prekurzorov buniek umožňujú nahliadnuť do biochemických dráh, ktoré vedú k adipozite a identifikácii rozhodujúcich signálnych molekúl alebo dráh, ktoré môžu kontrolovať vývoj obezity, a teda objavovať terapeutické liečivá pre túto chorobu. 15, 16, 17 Na získanie progenitorových buniek kostnej drene je však potrebná invazívna chirurgia, ktorá spôsobuje neprimeraný stres a potenciálne riziko pre darcu. Okrem toho Stolzing 18 uvádza, že existuje znížená schopnosť udržiavať homeostázu mezenchymálneho tkaniva u starých cicavcov v dôsledku poklesu počtu progenitorových buniek a funkčnosti v dôsledku akumulácie oxidačného poškodenia. To vedie k ťažkostiam pri hľadaní dostatočného množstva darcov na získanie dostatočného množstva progenitorových buniek dobrej kvality pre výskum a klinické aplikácie. Ľudské progenitorové bunky výstelky z pupočníka by slúžili ako alternatívny model štúdie in vitro . Všetky odobraté pupočníkové šnúry sú trvalo mladé a zdravé v priemere gestačného veku 40 týždňov a zásoby sú bohaté.

V tejto štúdii sme ukázali, že mezenchymálne progenitorové bunky sa môžu ľahko zbierať a udržiavať z ľudskej pupočníkovej výstelky pomocou metódy tkanivového explantátu. Drobné intraplazmatické lipidové kvapôčky pozorované v naivných CLMC farbením olejom Red O nie sú neočakávané, pretože CLMC je primárna bunková línia. Okrem toho zostáva morfológia naivných CLMC vretenovitá a fibroblastická. Toto je výrazný kontrast k nepravidelnému a kvádrovému tvaru adipocytov. Preto sa dá vyložiť, že CLMC nepodliehajú adipogenéze v neprítomnosti induktorov diferenciácie. V prítomnosti adipogénnych indukčných činidiel boli CLMC stimulované k diferenciácii na ALC, ako bolo vidieť v 20. dni. Všetky skupiny ošetrené diferenciáciou boli významne zafarbené pomocou Oil Red O v porovnaní s kontrolnou skupinou a mali bunkovú morfológiu podobnú typickým adipocytom. Bolo pozorované, že vyššia koncentrácia glukózy a inzulínu viedla k rýchlejšej a väčšej akumulácii lipidov. Preto bolo pozorované intenzívnejšie farbenie olejom Red O v skupine s vysokým obsahom glukózy s vysokým obsahom inzulínu, čo naznačuje, že v bunkách sa akumulovalo viac lipidov.

Adipogenéza v CLMC bola tiež potvrdená na genetickej úrovni, pri ktorej je zrejmá zvýšená regulácia expresie génu adipsínu a PPARy vo všetkých skupinách liečených diferenciáciou. Adipsín je serínová proteáza súvisiaca s imunitným systémom, ktorá je identická s komplementovým faktorom D. 19 Syntetizuje sa prevažne v tukových tkanivách a vylučuje sa do krvného obehu. Zistilo sa, že je regulovaná v niekoľkých, ale nie vo všetkých, modeloch obezity. Johnson a kol. 20 uvádza zníženú mRNA a proteín adipsínu u geneticky obéznych potkanov Zucker a Lowell et al. 21 tiež opísali zníženú expresiu adipsínu na začiatku vývoja obezity v modeli ob / obézny myš. V štúdiách týkajúcich sa ľudí sa však zistilo, že adipsín je vyšší so zvýšenou telesnou hmotnosťou. 22, 23 Upregulácia expresie génu adipsínu počas adipogenézy v tejto štúdii dobre koreluje s podobným pozorovaním, ktoré uviedli iné výskumné skupiny. 15, 24 PPARy je najviac adipózna špecifická podskupina receptorov nukleárnych hormónov PPAR a existuje ako dve izoformy: PPARy1 a PPARy2 . Ukázalo sa, že PPARy reguluje vývoj adipocytovej línie, pretože jej ektopická expresia spúšťa adipogenézu vo fibroblastových a svalových bunkách. 25 Zvýšená expresia génu PPAR y pozorovaná v tejto štúdii je evidentná, že CLMC boli podrobené adipogenéze. To je v súlade s pozorovaniami iných skupín zaoberajúcich sa mezenchymálnymi bunkami. 15, 17, 26 Neočakáva sa expresia génu PPAR y v naivných CLMC, pretože tento gén je indukovaný iba pred transkripčnou aktiváciou väčšiny adipocytových génov. 27 Neexistuje významný rozdiel v intenzite génovej expresie medzi štyrmi skupinami liečenými diferenciáciou a rôznymi koncentráciami glukózy a inzulínu. To naznačuje, že spolu s inými adipogénne indukujúcimi činidlami bola koncentrácia glukózy 1 mg ml- 1 a koncentrácia inzulínu 10 μg ml- 1 dostatočná na začatie adipogenézy CLMC. Zvyšujúca sa koncentrácia oboch faktorov neovplyvnila rozsah začatia diferenciácie.

Je známe, že zrelé adipocyty vylučujú leptín a adiponektín. 27 Leptín, produkt génu ob -16 kDa ob , je jedným z najdôležitejších hormónov odvodených od tukového tkaniva. Má kľúčovú úlohu pri regulácii príjmu a výdajov energie, vrátane chuti do jedla a metabolizmu. 28 Regulačná slučka spätnej väzby pôsobí prostredníctvom hypotalamických receptorov, aby inhibovala kŕmenie a zvýšila termogenézu, čo vedie k zníženiu telesnej hmotnosti. Hladina leptínu v sére koreluje s tukovou hmotou, zvyšuje sa s obezitou a je výrazne vyššia u žien ako u mužov aj po úprave na tukovú hmotu. 29, 30 Adiponektín, proteín 30 kDa, sa ukázal ako účinný pri regulácii homeostázy glukózy a lipidov a paradoxnom znížení obezity a cukrovky 2. typu. 31, 32, 33 Je to najhojnejší hormón vylučovaný tukovým tkanivom a má nepriamy vzťah s leptínom. Jeho plazmatické koncentrácie sú -1 000-krát vyššie ako koncentrácie leptínu, v rozmedzí od 1, 9 do 17, 0 mg ml- 1 u zdravých dobrovoľníkov. 32, 34, 35 Körner a kol. V bunkovej kultúre ľudských adipocytov sa preukázalo, že syntéza a sekrécia adiponektínu sa vyskytovala špecificky v zrelých adipocytoch. Preto by adiponektín mohol slúžiť ako charakteristický marker diferenciácie adipocytov. 36

V našej štúdii diferencované CLMC po 20 dňoch inkubácie v nízko glukózovom adipogénnom médiu vylučovali viac adiponektínu (nízka hladina glukózy s nízkym obsahom inzulínu: 313, 6 ± 105, 6 pg / 5 μg celkového proteínu, nízka glukóza s vysokým obsahom inzulínu: 292, 8 ± 91, 2 pg / 5 μg celkového proteínu ) a leptín (nízka hladina glukózy s nízkym obsahom inzulínu: 39, 1 ± 18, 9 pg / 5 μg celkového proteínu, nízka hladina glukózy s vysokým obsahom inzulínu: 50, 6 ± 11, 3 pg / 5 μg celkového proteínu) v porovnaní s naivnými CLMC (adiponektín: 0, 9 ± 1, 2 pg / 5 μg celkom) proteín, leptín: 1, 2 ± 2, 0 pg / 5 μg celkového proteínu) v 20. deň. To naznačuje, že CLMC sa diferencovali na zrelé ALC a napodobňuje paradigmu vylučovania fyziologického adipocytokínu u dospelých s normálnou hmotnosťou, u ktorých je prítomných oveľa väčšie množstvo adiponektínu ako u dospelých. leptín v plazme. Na druhej strane sa množstvo adipocytokínov vylučovaných ALC inkubovaných v vysoko glukózovom adipogénnom médiu drasticky znížilo ~ 300-násobne pre adiponektín a 5-násobne pre leptín. Pokles sekrécie adiponektínu sa pripisuje výskytu obezity. Podľa štúdií iných výskumných skupín o obezite by inverzný vzťah medzi koncentráciami adiponektínu a leptínu mal spôsobiť zníženie hladiny adiponektínu a zvýšenie hladiny leptínu. 32, 34, 35 Nedostatočná redukcia príjmu potravy a zvýšenie energetickej spotreby napriek zvýšenej koncentrácii leptínu v ľudskej obezite sú spojené s rezistenciou na leptín. 37 Jeden z mechanizmov, o ktorých sa predpokladá, že je zodpovedný za rezistenciu na leptín, je porucha transportného systému leptínu hematoencefalickou bariérou, takže leptín je u obéznych jedincov menej účinný. 37, 38, 39 Nedostatočný regulačný mechanizmus spätnej väzby vedie k kompenzačnému zvýšeniu sekrécie leptínu na udržanie regulácie príjmu energie a výdavkov. Pri náležitom zvážení, že veľký rozdiel v rozsahu vylučovania adipocytokínov medzi liečbami s nízkym a vysokým obsahom glukózy môže spôsobiť, že obojsmerná ANOVA bude menej citlivá pri zisťovaní štatistickej významnosti; uskutočnil sa doplnkový individuálny t- test medzi každou skupinou liečenou diferenciáciou a naivnými CLMC. Najlepší výsledok pre ALC v diferenciačných médiách s nízkym obsahom glukózy ukázal významné rozdiely v sekrécii leptínu a adiponektínu, čo sa zhodovalo s výsledkom dvojsmernej ANOVA. Na druhej strane, na porovnanie medzi naivnými CLMC a ALC v médiu s vysokým obsahom glukózy, t- test nevykazoval žiadny významný rozdiel v sekrécii adiponektínu, ale významný rozdiel v sekrécii leptínu. Tento výsledok je odlišný od výsledku dvojsmernej ANOVA, ktorá nedokázala zistiť štatistický rozdiel pre sekréciu leptínu. Naša štúdia in vitro preto ukazuje, že ALC inkubované v médiu s vysokým obsahom glukózy sú podobné adipocytom u obéznych jedincov, u ktorých je veľmi nízka sekrécia adiponektínu a vysoká sekrécia leptínu. Vzhľadom na predchádzajúce zistenia, že koncentrácia leptínu sa zvyšuje s tukovou hmotou 29, 30 a blízka podobnosť našich ALC v médiu s vysokou glukózou voči adipocytom v obezite, očakávalo sa, že sekrécia leptínu bude vyššia v liečebných skupinách s vysokou hladinou glukózy ako pri liečbe s nízkym obsahom glukózy. skupiny. To sa však nedodržalo. Vývoj obezity in vivo zahŕňa komplexnú súhru početných bunkových signálov a dráh, ktoré ešte nie sú úplne objasnené. Vplyv iných biochemických signalizácií, ako sú signály z hypotalamu, na celkové zvýšenie koncentrácie leptínu v obezite je mimo záujmu tejto štúdie.

Vyššie uvedené výsledky spoločne ukázali, že CLMC sa môžu indukovať k ALC. V kultivačných podmienkach s nízkym obsahom glukózy sú získané ALC porovnateľné s adipocytmi jedincov s normálnou hmotnosťou, pretože vylučujú viac adiponektínu ako leptínu. Zatiaľ čo v podmienkach kultivácie s vysokým obsahom glukózy sa získané ALC prirovnávajú k adipocytom obéznych jedincov kvôli extrémne malému množstvu vylučovaného adiponektínu. Okrem toho vyššia koncentrácia inzulínu zosilnila lipogenézu.

Vzhľadom na to, že záľuba nadmerného dopúšťania sa a zotavovania sa v sedavom spôsobe života stúpa s rastúcim blahobytom rozvojových krajín, obezita a ďalšie súvisiace choroby vyvolávajú obavy o zdravie. Presné molekulárne a bunkové zapojenie do rozvoja obezity a súvisiacich metabolických chorôb je ešte potrebné objasniť. V našej snahe odhaliť záhadu patogenézy a usilovať sa o terapeutické riešenia majú progenitorové bunky výstelky ľudskej šnúry potenciál byť dobrým alternatívnym zdrojom buniek na štúdium in vitro chorôb a vývoja terapeutík. V prítomnosti rôznych glukózových a inzulínových adipogénnych médií sa získali ALC podobné ako u jedincov s normálnou hmotnosťou alebo obéznymi jedincami.